禽流感病毒间接原位RT-PCR检测方法专利登记公告

专利名称：禽流感病毒间接原位RT-PCR检测方法

摘要：本发明公开了一种特异性好、敏感性高的禽流感病毒间接原位RT-PCR检测方法，从GeneBank下载禽流感病毒NP基因序列，通过比对选取NP基因中较为保守的片段，设计一对引物，运用RT-PCR法合成检测所用的标记探针，然后在经前处理后的细胞涂片和石蜡切片上用上述引物进行原位RT-PCR，再与地高辛标记的探针进行原位杂交，对细胞和组织中的禽流感病毒进行检测和定位。研究结果表明，本方法能检测出约1pg/uL质粒的DNA，并能特异性地在细胞涂片和石蜡组织切片中检测和定位禽流感病毒，且成纤维细胞感染病毒8h后即可检

专利类型：发明专利

专利号：CN200910214055.1

专利申请（专利权）人：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局

专利发明（设计）人：杨素;陈博文;沙才华;廖明;徐海聂;廖秀云

主权项：一种禽流感病毒间接原位RT-PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)根据GenBank数据库中AIV??NP基因的核苷酸序列，设计一对引物，核苷酸序列及长度如下表：(2)利用上述的引物序列通过RT-PCR法制备探针，采用地高辛标记；(3)样品的采集和标本的制备，将细胞或组织固定在玻片上，并作蛋白酶K消化预处理；(4)原位RT-PCR反应，在处理好的组织或细胞片上，加入反应液进行反转录和两次原位PCR扩增；(5)RT-PCR扩增结束后，加入含有步骤(2)中制备的标记探针的杂交液，进行原位杂交；(6)

专利地区：广东