一种人羊膜间充质干细胞的分离纯化及鉴定方法专利登记公告

专利名称：一种人羊膜间充质干细胞的分离纯化及鉴定方法

摘要：本发明公开了一种人羊膜间充质干细胞的分离纯化及鉴定方法，hAMSCs的分离方法为将人羊膜剪成碎片，用EDTA的胰蛋白酶，DNaseI的胶原酶分二步旋转消化，用钢网过滤，收集细胞滤液即为分离的原始hAMSCs；hAMSCs的纯化方法是原始hAMSCs用LG-DMEM培养基置于CO2培养箱培养，在倒置显微镜下除去完全未贴壁生长的羊膜上皮细胞，第3天更换新的培养基，待细胞汇合度达80~90%后，用胰蛋白酶—EDTA溶液消化收集细胞即可获得高纯度的hAMSCs；hAMSCs的鉴定方法采用免疫细胞化学染色波形蛋白和

专利类型：发明专利

专利号：CN201110404587.9

专利申请（专利权）人：遵义医学院附属医院

专利发明（设计）人：方宁;陈代雄

主权项：一种人羊膜间充质干细胞的分离纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：第一，无菌采集人足月剖宫产胎盘，机械法将羊膜从胎盘组织上剥离，用D?Hank’?s液冲洗数次以清除残留血迹，将羊膜剪成碎片；第二，羊膜碎片加入含0.02%EDTA的0.05%胰蛋白酶消化溶液，于37°C，旋转消化弃上清；重新加入消化液，于37°C旋转消化弃上清，留取未消化的羊膜碎片；第三，D?Hank’s液冲洗未消化的羊膜碎片，加入含有0.075?mg/ml?DNase?I的0.75?mg/ml的胶原酶，于37°C，旋转消化约2?h至组织完全

专利地区：贵州