一种悬钩子属植物中期染色体荧光原位杂交方法专利登记公告

专利名称：一种悬钩子属植物中期染色体荧光原位杂交方法

摘要：本发明公开了一种悬钩子属原位杂交方法，包括制片、制备探针、杂交前预处理、制备杂交液、制片变性、杂交和检测七个步骤。其中，制片采用根尖压片法，制片前处理时用2％纤维素酶和2％果胶酶在37℃下酶解细胞壁1.5h，探针采用单色标记，杂交前杂交液需在100℃变性5min，杂交时在37℃温育18h。本发明所述的杂交方法能有效消除背景干扰，提高检测灵敏度和准确性。本发明适用以45S?rDNA、5S?rDNA和悬钩子属植物基因组为探针的悬钩子属植物的染色体原位杂交。

专利类型：发明专利

专利号：CN201210032586.0

专利申请（专利权）人：四川农业大学

专利发明（设计）人：王小蓉;汤浩茹;南红;王燕;刘泽静;陈清;陈涛;黄晓姣;何文

主权项：一种悬钩子属植物中期染色体荧光原位杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制片：取悬钩子根尖，预处理，固定，然后用1mol·L?1?HCl在60±0.5℃下解离40s，压片，液氮冻片，干燥；2)制备探针：提取选自悬钩子植物基因组DNA或通过PCR，得到目的片段45S?rDNA或5S?rDNA，用荧光素进行标记，制得探针；3)杂交前预处理：依次用2％纤维素酶和2％果胶酶混合液、100μg·mL?1的DNase?free?RNaseA、1mg·mL?1的蛋白酶K和45％醋酸处理，再用4％多聚甲醛固定，然后依次

专利地区：四川