提高富马酸产量的基因工程菌株及构建方法及其应用专利登记公告

专利名称：提高富马酸产量的基因工程菌株及构建方法及其应用

摘要：本发明公开了提高富马酸产量的基因工程菌株及构建方法及其应用，构建方法为：(1)乳酸脱氢酶基因ldhL的克隆；(2)包含真菌启动子序列、反向ldhL基因序列以及终止子序列的重组片段构建；(3)潮霉素抗性基因的克隆；(4)含有抗性基因重组基因片段的构建；(5)重组质粒的构建；(6)重组根癌脓杆菌的获得；(7)重组米根霉菌株的获得：本发明的菌株在充分好氧条件下利用葡萄糖发酵高浓度积累富马酸，与野生米根霉菌株相比，副产物乳酸含量低，生产富马酸的最终发酵浓度和生产强度得到显著提高，缩短了生产时间，从而降低了发酵液中

专利类型：发明专利

专利号：CN201210044717.7

专利申请（专利权）人：常茂生物化学工程股份有限公司

专利发明（设计）人：朱建国;万屹东;王伟;尤吉;陆瑾连;芮新生

主权项：提高富马酸产量的基因工程菌株的构建方法，其特征是包括如下步骤：(1)乳酸脱氢酶基因ldhL的克隆：以提取的米根霉细胞基因组DNA为模板，分别以序列表SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2为上、下游引物，进行PCR反应，扩增出SEQ?ID?No.5所示的乳酸脱氢酶ldhL基因序列，提纯，将提纯后的乳酸脱氢酶ldhL基因序列与pMD18?simple?T载体连接，得到重组pMD18?simple?T载体，进行序列测定，酶切所述重组pMD18?simple?T载体，得到包含酶切位点的ldhL基因片段；(

专利地区：江苏