山羊Myostatin基因敲除载体的构建方法专利登记公告

专利名称：山羊Myostatin基因敲除载体的构建方法

摘要：本发明公开了一种山羊Myostatin基因敲除载体的构建方法。该方法根据绵羊Myostatin基因序列，设计了两对PCR引物，以山羊胎儿成纤维细胞中提取的基因组DNA为模板，采用高保真长片段Taq酶，通过Long-PCR方法来扩增获得同源臂，同源长短臂分别为4.6kb和1.9kb。为验证所得到的同源臂序列是否可用，将扩增片段分别克隆到pMD18-T载体上，酶切、PCR鉴定后进行序列测定及同源性比较。再将同源长、短臂分别克隆到载体pLOXP，后用酶切、PCR方法进行鉴定。筛选得到构建含有neo和HSV-tk

专利类型：发明专利

专利号：CN201210060220.4

专利申请（专利权）人：安徽农业大学

专利发明（设计）人：任春环;张子军;程箫;黄桠锋;郭晓飞;陈家宏;骆先虎;刘洪瑜;刘旭光

主权项：一种山羊Myostatin基因敲除载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计4对引物，2对引物用于山羊胎儿成纤维细胞基因组DNA中扩增片段，即扩增出MSTN基因同源长臂的引物LAF和LAR和扩增出MSTN基因同源短臂的引物SAF和SAR；另2对引物用于鉴定pLOXP?MSTN转染山羊胎儿成纤维细胞获得抗性克隆细胞，即用于从pLOXP?MSTN转染山羊胎儿成纤维细胞中扩增同源短臂的引物SAF1和SAR1；用于从pLOXP?MSTN转染山羊胎儿成纤维细胞中扩增基因neo部分序列的引物NF和NR；(2

专利地区：安徽