嗜酸性喜温硫杆菌的基因无痕敲除和整合方法专利登记公告

专利名称：嗜酸性喜温硫杆菌的基因无痕敲除和整合方法

摘要：本发明公开了一种无痕敲除嗜酸性喜温硫杆菌染色体基因或将外源基因插入染色体的方法，是将含有大范围核酸内切酶I-SceI酶切位点的同源重组质粒采用接合转移的方式转入喜温硫杆菌中，同时利用细胞自身的同源重组系统，将同源重组质粒定向插入到喜温硫杆菌染色体中，筛选到的单交换子用电转化法转入I-SceI表达质粒，在I-SceI酶切断染色体的压力下，单交换子染色体发生第二次同源重组，优化筛选到双交换菌株，实现了基因的敲除或插入。本发明同时构建了用于同源重组的自杀型质粒载体pSDUDI，和有效表达I-SceI酶的质粒pS

专利类型：发明专利

专利号：CN201210089108.3

专利申请（专利权）人：山东大学

专利发明（设计）人：林建群;吴燕;张成家;林建强

主权项：一种无痕敲除嗜酸性喜温硫杆菌染色体基因或将外源基因插入嗜酸性喜温硫杆菌染色体的方法，步骤包括构建同源重组的自杀型质粒载体，在载体的多克隆位点处插入同源臂得到同源重组质粒，将构建的同源重组质粒通过化学转化法转入大肠杆菌SM10菌株，通过接合转移法将同源重组质粒从E.coli?SM10菌转入嗜酸性喜温硫杆菌中，平板筛选单交换子并进一步鉴定，构建大范围核酸内切酶I?SceI的表达质粒并用电转化法转入单交换子中，平板筛选双交换子并进一步鉴定；其中：所述自杀型质粒载体是pSDUDI，质粒pSDUDI的核苷酸序列如S

专利地区：山东