一种GH18家属几丁质酶基因的克隆方法专利登记公告

专利名称：一种GH18家属几丁质酶基因的克隆方法

摘要：本发明公开了一种糖苷水解酶第18家属(GH18家属)——几丁质酶基因克隆的方法。发明利用单一碳源的特殊培养基筛选得到产几丁质酶的细菌，采用独特有效的半嵌套简并引物进行细菌GH18家属几丁质酶基因片段的扩增，然后利用sitefinding?PCR方法或反向PCR方法获得全长的几丁质酶基因。然后构建几丁质酶基因的表达质粒，在大肠杆菌中进行基因的诱导表达。本发明的方法有效可靠，建立了一套行之有效的新型GH18家属几丁质基因克隆方法，为最终构建几丁质酶工程菌株，实现工业化生产几丁质酶奠定基础。

专利类型：发明专利

专利号：CN201210097502.1

专利申请（专利权）人：浙江大学

专利发明（设计）人：朱旭芬;张文武;吴敏

主权项：一种从产几丁质酶的菌株中克隆几丁质酶基因的方法，包括如下步骤：(1)将已知的GH18家属几丁质酶基因进行序列比对，找出核心保守序列；(2)设计能扩增几丁质酶基因片段的简并引物；(3)以产生几丁质酶菌株的基因组为模板，利用简并引物通过半嵌套PCR法扩增细菌几丁质酶部分基因片段；(4)利用获得的部分基因序列，设计嵌套引物，通过sitefinding?PCR法或反向PCR法步移获取全长几丁质酶基因。

专利地区：浙江