生产抗生素A40926复合物及其纯因子PA.PB.A.B.及B₀的方法专利登记公告

专利名称：生产抗生素A40926复合物及其纯因子PA.PB.A.B.及B₀的方法

摘要： 本发明涉及一类新抗生素,称作抗生素A40926复合物和其因子A,B,B₀,PA及PB.用培养新的ActinomaduraspATCC39727菌或其生产A40926的变种或突变体从而生产它们的方法,用这些新抗生素治疗传染病及致病微生物.本发明抗生素属于能够结合酰基-D-丙氨酰-D-丙氨酸的万谷霉素抗生素类的糖肽类物质.

专利类型：发明专利

专利号：CN85107903

专利申请（专利权）人：格鲁波莱佩蒂特公司

专利发明（设计）人：恩里科·塞尔瓦; 鲁西诺·加斯塔尔多; 格拉茨亚·布里塔; 安吉洛伯费;贝思·P·格尔德斯蒂英; 维托里奥·阿里奥利; 吉奥尼瓦·卡萨尼弗朗西斯科·帕恩蒂

主权项：一种制备抗生素物质的方法，抗生素物质选自抗生素A40926复合物，抗生素A40926因子A，抗生素A40926因子B，抗生素A40926因子Bo，抗生素A40926因子PA，抗生素A40926因子PB，其混合物和其加成盐，其特征在于：非盐形式的抗生素A40926因子A：A）紫外吸收光谱表现出下列最大吸收：λmax （nm）a）0．1NHC1 281b）磷酸盐缓冲液PH7．38 281300（肩峰）c）0．1N氢氧化钠或氢氧化钾 300d）甲醇 282e）磷酸盐缓冲液pH9．0 282300 （肩峰）B）红外吸收光谱表现出下列最大吸收（Cm－1）： 3700－3100，3100－2800 （医药用润滑油）；1655；1620－1560； 1510 ； 1480－1410 （医药用润滑油）；1375 （医药用润滑油）；1320－1250；1250－1190 ； 1100－950；845 ； 810 ； 720 （医药用润滑油）C）H－NMR波谱表现出下列几组信号（以ppm表示），在DMSOd6中记录，270MHZ，使用了TMS作为内标准（0．00ppm），a＝ppm）：a0．86 （t1s，6H）；1．21（～1 1 H）；1．43（2H）；2．01 （ 2H）；2．31－2．34（3H）；4－6．2（～1 6H）；6．2-8（~23H）；8．44，9．22，9．66（宽带；动态质子）2．5－4：来自H2O峰的干涉D）相对于Teiooplanin A2组分2（Rt＝20．3分）的滞留时间（Rt）为1．22，反相HP L C的分析条件如下：柱： U ltrasphere ODS（ 5微米）Altex（Beokman）4．6毫米（i．d）×2 5 0毫米预备柱： Brownlee Labs RP18 （ 5微米）洗脱版A：CH3CN（2．5g／l）NaH2PO4。H2O 90％）pH6．0洗脱液B：CH3CN洗脱：以洗脱液B在洗脱A中占5％－60％的线性梯度，洗脱40分钟流速：1．8毫升／分紫外检测：254nm内标准： Teiooplanin A2组分2（GruppoLepetit S·p·A）在相同的条件下，相对于睾酮（Roussel Uclaf）的滞留时间为0．60。E）元素分析，样品在情性气体（△W4．6％）中以140℃先干燥之后进行，指出了各组分（平均）百分数的大约值：碳55．82％，氢5．1 7％，氮6．31％，氯（全部）4．24％，氯（离子）0．37％，900℃空气中无机残留为1．2％F）酸碱滴定，2－甲氧基乙醇（MCS）：水，4： 1，在加入稍过量的HCl之后，用KOH滴定，指出4个可离子化功能区具有以下的pKMCS：4．6，5．6，7．2，9．2，G）Rf值为0．24，相对于Teicoplanin A2组分2的Rf为0．70，层析系统如下：5％（W／V）Na2 SO4溶液 70乙腈 30使用硅烷化硅胶60F25 4 M erck板（层厚0．25毫米）显色：——紫外明亮——Pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J．Chrom－atog．20， 171 （ 1 965），Z，Physiol ． Chem．292， 99（1953）]——在最小Davis养基上使用B．subtilis ATCC 6633生物自显影，H）分子量为1716，由FAB－MS波谱推出，其表现M＋H∴的峰为1717非盐形式的抗生素A40926因子B：A）紫外吸收尤谱表现出下列最大吸收：λmax （nm）a） 0． 1NHCl 2 82b）磷酸盐缓冲液pH7．38 281300（肩峰）c）0．1N氢氧化钠或氢氧化钾 300d）磷酸盐缓冲液P H 9．0 283300（肩峰）e）甲醇 282B）红外吸收光谱表现出下列最大吸收（cm－1）：3700－3080，3080－2700（医药用润滑油）；1720－1625，1625－1560 ； 1505 ； 1460 （医药用润滑油）；1375 （医药用润滑油）； 1295 ； 1230 ； 1210 ；11 50 ； 1 1 00－1 040 ； 1 030 ； 1 015 ； 970 ； 890 ；840 ； 810 ； 720 （医药用润滑油）c）1H－NMR波谱表现出下列各组信号（以ppm表示），在DMSOd6中记录的1H－NMR 270MHZ，使用TMS作为内标准（0．00ppm，（a＝ppm）a0．85（d，异丙基CH31S）；1．15（~13H）；1．44（~2H）2．02（2H）；2．32－2．35（3H）；4－6．1（~6H）；6．1－8（~23H）；8．52，9．30，9．68（宽带，动态质子）2．5－4：来自H2O峰的干涉D）滞留时间（Rt）为1．22，相对于Teiooplanin A2组分2（Rt＝20．3分）的滞留时间为1．27，反相HPLC分析的条件如下：柱： Ultrasphere ODS（5微米）Altex（Beokman）4．6毫米（i．d） × 250毫米预备柱： Brownlee Labs RP18（5 微米）洗脱液A：CH3CN洗脱液B：CH3CH（2．5g／l）NaH2 PO4·H2O 30％PH6．0洗脱：以洗脱液B在洗脱液A中占5％～60％的线性梯度，洗脱40分钟流速：1．8毫升／分紫外探测：254纳米内标准Teiooplanin A2组分2 （ GruppolepetisS．P．A）E）元素分析，样品先在约140℃情性气体中（△w9．6％）干燥，指出各组分（平均）有分数大约为：碳54．09％；氢5．13％，氮6．34％，氯（全部）4．12％；氯（离子）0．39％；900℃空气中无机灰份为5％；F）酸碱滴定，2－甲氧基乙醇（ MCS ）：水，4：1，当加入稍过量的HCl（pH2．7）后用Ko H滴定，其表明4个可离子化功能区具有如下所示的pKmcs：4．5，5．6，7．2，9．2，G）Rf值为0．21，相对于Teicoplanin A2组分2的Rf值为0 ．53，层析系统如下：5％（w／v）Ra2SO 4溶液 70乙腈 30使用硅烷化硅胶60F54 Merck板（层厚0．25毫米）显色：——紫外明亮——Pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J．chromatog——在最小Davis培养基上用B．subilis ATCC 6633生物自显影H）分子量为17 3 0，由FAB－MS 波谱推出，其表示M＋H∴峰在1731非盐形式的抗生素A40926因子BA）紫外吸收光谱表明以下最大吸收：λAmax（nm）a）0． 1NHCl 282b）磷酸盐缓冲液PH7．38 281（肩峰）c） 0．1N氢氧化钠或氢氧化钾 300d）磷酸盐缓冲液pH9．0 283e）甲醇 300（肩峰）282B）红外吸收光谱表现出下列最大吸收（cm－1）： 3700－3080 ， 308O－2700（医药用润滑油）； 1720－1625；1625－1560 ； 1505 ； 1460（医药用润滑油）； 1375（医药用润滑油）； 1295 ； 1230 ； 1210，1150 ； 1100－1040；1030 ； 1015 ； 970 ； 890 ； 840 ； 810 ； 720（医药用润滑油）C）4H－NMR波谱表现出下列几组信号（以ppm表示），在DMSOd6中记录1H－NMR，270MHZ，使用TMS作为内标准（0．00ppm），（a＝ppm）；a0．85（a，异丙基CH31S）； 1．15 （～13 H ）；1． 44 （～2H）；2．02 （2H）；2．32－2．35 （ 3H）；4－6．1（～16H）；6．1－8（～23H）； 8．52，9．30，9．68（宽带，动态质子）2．5－4：来自H2O峰的干涉D）相对于Teicoplanin A2 组分2 （ Rt＝20．3分）的滞留时间（Rt）为1．22，反相HPLC分析的条件如下：柱： Ul trasphere ODS （ 5微米）Altex（Beck－man）4．6毫米（i．d）×250毫米预备柱：Brownlee Labs RP1 8（5微米）洗脱液A：CH3CN洗脱液B：CH3CN（2．5g／l）NaH2PO4．H2O 30％PH6．0洗脱：以洗脱液B在洗脱液A中占5％～60％的线性梯度洗脱40分钟流速：1．8毫升／分紫外检测：254nm内标准： Teicoplanin A 2 组分2 （ Gruppo LepetitS．P．A）E）元素分析，样品先在140℃惰性气体（△w9．6％）中干燥，指出各组分（平均）百分数大约为：碳54、09％，氢5．13％，氮6．34％，氯（全部）4．12％，氯（离子）0．39％，在900℃空气中无机灰分为5％F）酸碱滴定，2－甲氧基乙醇（MCS）：水，4：1，加入稍过量HCl之后用KOH滴定，表明有4个可离子化的功能区具有下述pKmcs；4．5，5．6，7．2，9．2G）Rf值为0．21，相对于Teicplanin A2组分2的Rf值为0．53，层析系统如下：5％（w／v）Ma2SO4溶液 70乙腈 30使用硅烷化硅胶60F254 Merck板（层厚0．25毫米）显色：——紫外明亮——pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J．Chrom－atog 20， 171（1965），Z．Physiol，Chem．292，99，（1953）]——在最小Davis培养基上用B．subtilis ATCC 6633生物自显影H）分子量为1730，由FAB－MS 波谱推出，其表现为M＋H∴峰在1731非盐形式的抗生素A40926因子PAA）紫外吸收光谱表现出下列最大吸收：λmax（nm）a）0．1N HCl 282b）0．1N氢氧化钾 300c）磷酸盐缓冲液pH7．38 282300（肩峰）d）磷酸盐缓冲液pH9． 0 283300（肩峰 ）B）红外吸收光谱表明下列最大吸收（cm-1）：1710； 1655 ； 1620－1550； 1505 ； 1460（医药用润滑油）； 1375（医药用润滑油）； 1260，1250－950 ；845；805 ； 720 （医药用润滑油）C）1H－NMR波谱表明下列各组信号（以ppm），在DMSOd6中记录1H－NMR，270MH2，用TMS为内标准（0．00ppm），（a＝ppm）：0．86，d1S（ CH 3）；1．15－1．22，m（CH2）n；1．41，m（CH2）；2．01， s（CH3）； 2．01，m（CH2）； 2．28，S（N－CH3 ）； 4．26－5．96， br（缩肽的和芳族的CH1S）；6．33－7． 73br（芳族的CH1s和缩肽的NH1s）br＝宽峰d＝双峰dd＝双倍双峰m＝多峰S＝单峰t＝三峰D）相对于Teicoplanin A 2 组分2（Rt＝20．3分）的滞留时间（Rt）为1．15，反相HPLC分析的条件如下：柱： Ultrasphere ODS（5微米）Altex （Beokman）4．06毫米（i． d ）×250毫米预备柱： BroWnlee Labs RP18（5微米）洗脱液A：CH3CN洗脱液B：CH3CN（2． 5g／l）NaH2PO4．H2O 30％ pH6．0洗脱：以洗脱液B在洗脱液A占5％－60％的线性梯度洗脱40分钟流速：1．8毫升／分紫外检测： 25 4nm内标准： Teicoplanin A2 组分2（ Gruppo LepetitS．P．A）E）相对于Teicoplanin A2组分2的Rf值为0．62，层析系统如下：5％（w／v）Na2 SO4溶液 ， 70乙腈 30使用硅烷化硅胶60F254Merck板（层厚0．25毫米）显色：——紫外明亮——Pau1y试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J．Chromatog．20， 171，（1965），Z．Physio]．Chem． 292，99， （1953）]——在最小Davis培养基上用B．subtils ATCC6633生物自显影F）分子量约1758，由FAB－MS波谱推出，其一群峰中最大峰为1761，FAB－MS分析的工作条件如下：仪器：装有FAB枪Ion Tech的VGMod ZAB SE条件：阳性FAB，Xe加速电压为8Kv基质：硫代甘油－甘油1／1（v／v）非盐形式的抗生素A 40926因子 PBA）紫外吸收光谱表现为下列最大吸收：λmax（nm）a）0．1N HCl 282b）0．1N氢氧化钾 300c）磷酸盐缓冲液pH7．38 282300（肩峰）d）磷酸盐缓冲液pH9． 0 282300 （肩峰）B）红外吸收光谱表现出下列最大吸收（cm－1）：370O－310O， 3000－2900（医药用润滑油）； 1761－1710；1655；1620－1 560 ； 1 605：1480－1 420（医药用润滑油）； 1375（医药用润滑油）； 1320－1270 ； 1230－11 90 ； 1 150，112O－920 ； 845 ；810 ； 720（医药用润滑油）C．1）1H－NMR波谱表现出下列各组信号（以ppm表示），在DMSOd6中，270MHZ用TMS作为内标准（0．00ppm）， （a＝ppm）多重性（属性）：0．84， d（异丙基CH31s ）； 1．17，m（CH2 ）n；1．43m（CH2），1． 99， s （ CH 3）；2．01，m（CH2）；2．31，S（N－CH3）；2．79，dd（C－H）；3．70，m（C－H）；4． 06－6．02，br（缩肽的或芳族的CH1s） ；6．45－7．74，br芳族的CH1S和缩肽的NH1s）；8．19－9． 99 ，br （缩肽的NH1s和酚的OH1s）C．2）1H－NMR波谱表现出下列几组信号（以ppmy计），在DMSOd6＋CF 3 COOD中，270MHZ，以TMS为内标准（0．00ppm），（a＝ppm）多重性；（属性）：0．84，d（异丙基CH31s）； 1． 13，m（CH2）n；1．40，m（CH2）；1．98， s（CH3），2． 00， m（CH2 ）； 2．92，dd（C－H）；3．29－3．71，m（糖c－H1s）；4．07－6．09，s和 m （缩肽的和芳族的CH1s）；6．45－7．83，s和m（芳族的CH1s和缩肽的NH1s）；8．17－10．38（缩肽的NH1s，酚的OH1s）D）滞留时间（ Rt）为1．27，相对于TeicoplaninA2组分2（Rt＝20．3分）的滞留时间为1．32，反相HPLC分析层析的条件如下：柱：Ulrasphere ODS （ 5微米）Altex（Beckman）4．6毫米（i．d）％250毫米预备柱：Brownlee Labs RP18（5微米）洗脱液A：CH3CN洗脱液B：CH3CN洗脱：以洗脱液B在洗脱液A中占5％－60％的线性梯度洗脱40分钟流速：1．8毫升／分紫外检测： 254nm内标准： TeiooplaninA2组分2（GruppoLepetit S·P·A）E）相对于Teicoplanin A2组分2的Rf值为0．53，层析系统为：5％（w／v）Na2 SO4溶液 70乙腈 30使用硅烷化硅胶60F254 Merck板（层厚0．25毫米）显色：——紫外明亮——pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J．Chrom－atog ． 20， 171 （1965），Z．Physiol．Chem．292，99， （ 1 953）]——在最小Davis培养基上用B．subtilis ATCC 6633生物自显影F）分子量为1772，自FAB－MS波谱推出，其一群峰中的最大峰为1776，FAB分析的工作条件如下：仪器：装备有FAB枪Ion Teoh 的VG Mod ZAB SE条件：阳性FAB，Xe加速电压为8KV基质：硫代甘油－甘油1／1（v／v）；该方法包括，在有碳原，氮源和无机盐存在的浸没厌氧条件下，培养Actinomadura sp·ATCC39727菌，或抗生素A 40926生产菌的突变体或其变种，从发酵液中分离并回收所述的抗生素，如果需要，将其转变为所需要的盐。

专利地区：意大利