白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库的构建方法专利登记公告

专利名称：白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库的构建方法

摘要：本发明公开了白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库的构建方法，该方法包括样品处理，总RNA提取、mRNA纯化、试验方和驱动子的抑制差减杂交及PCR扩增，抑制PCR产物与pMD18-T载体连接，连接产物转化、单克隆的保存等。本发明方法所构建的白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库灵敏度高，通过了目标片段的富集作用可以确保受白叶枯病菌胁迫后低丰度表达的cDNA被检测到；该文库插入片段平均长度450bp，可一次快速获得大量普通野生稻受白叶枯病菌胁迫的差异表达ESTs，为分离克隆抗白叶枯病相关基因的全长cDNA序列提

专利类型：发明专利

专利号：CN201210129931.2

专利申请（专利权）人：云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所

专利发明（设计）人：程在全;黄兴奇;蒋春苗;孙正文;李定琴;李维蛟;殷富有;张敦宇;钟巧芳;余腾琼;陈玲;王玲仙;付坚;李娥贤;蒋聪;罗红梅;王波

主权项：白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库构建方法，包括以下步骤：（1）普通野生稻叶片材料的接菌处理??①将白叶枯病菌菌株，划线于NA培养基平板上，28℃培养2?3?d进行活化，活化后用无菌蒸馏水洗下菌苔，麦法兰分度计比浊法配制成6×108·?ml?1的菌液；②用沾取了菌液的剪刀从叶尖减去2?3?cm的剪叶接种法接种白叶枯病菌于26?28℃温室中的普通野生稻叶片，每个菌株接3墩，30片叶子，对照以无菌水代替菌液接种普通野生稻叶片作为对照；③接菌后每隔24?h，分别于24?h、48?h、72?h、96?h、120

专利地区：云南